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當前位置:首頁技術文章丙二醛(MDA)檢測試劑盒(TBA比色法)

丙二醛(MDA)檢測試劑盒(TBA比色法)

更新時間:2025-09-09點擊次數(shù):24

產(chǎn)品簡介:

     動物或植物細胞發(fā)生氧化應激(oxidative stress) 時,會發(fā)生脂質氧化,丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一種生物體脂質氧化的天然產(chǎn)物,一些脂肪酸氧化后逐漸分解為一系列包括MDA在內的復雜化合物,此時通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的水平,因此MDA的測定被廣泛用作脂質氧化的指標。生物體內的一些其它生化反應也會產(chǎn)生MDA,例如thromboxane synthase 也可以催化產(chǎn)生,但只要在測定時設置適當對照即可觀察到脂質氧化水平的變化。 

自備材料:

1、生理鹽水或 PBS

2、離心機、離心管或 96 孔板、光分光光度計或酶標儀、水浴鍋或恒溫箱

操作步驟(僅供參考):

1、準備樣品:

①血清、血漿、尿液、腦脊液樣品:從待測樣本中分離出的血清或血漿不應有溶血,直接檢測,如超過線性范圍,用生理鹽水或 PBS 稀釋后檢測。

②組織、細胞等樣品:組織或細胞可以使用PBS或 RAPI裂解液等進行勻漿或裂解,勻漿或裂解組織時組織重量占勻漿液或裂解液的比例應為10%;對于細胞,每106個細胞使用 0.1ml裂解液或勻漿液,勻漿或裂解后4℃ 8000~12000g 離心10min,取上清用于后續(xù)測定。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或 4℃條件下進行操作,樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內MDA 含量。

③該試劑盒對于樣品中的常見化學成分的兼容性參考下表:

試劑類別

化學成分

是否干擾

 

緩沖液

HEPES (100mM)

Borate (50mM)

Phosphate (100mM)

Tris (25mM)

 

去垢劑

CHAPS (≤1%)

Triton X-100 (≤1%)

Tween 20 (≤1%)

 

 

抑制劑/螯合劑

PMSF (≤200μM)

EDTA (≤1mM)

EGTA (≤1mM)

Antipain (≤100μg/ml)

Chymostatin (≤10μg/ml)

Leupeptin (≤10μg/ml)

Trypsin (≤10μg/ml)

其他

Glycerol (≤10%)

Sucrose (250mM)

2、配制TBA 工作液:稱取適量TBA,用TBA稀釋液配制成濃度為0.68%的TBA工作液; 例如取68mgTBA用10ml TBA 稀釋液配制,最終濃度即為0.68%的TBA工作液,TBA工作液需溶解后再使用,可以加熱到 60℃促溶,并可通過反復劇烈Vortex促溶; 配制

好的TBA工作液 4℃避光保存,至少1個月內有效。

3、稀釋系列標準品:取適量 MDA 標準品(1mmol/L),用恰當溶液稀釋至 1、2、5、10、20μM(如果進行簡易快速檢測,標準品直接稀釋10μM)。注意:待測樣品為血清、血漿時,標準品宜用生理鹽水稀釋;待測樣品由勻漿液、裂解液、PBS 獲得時,標準品宜用相同溶液稀釋,其原則是保證空白管、標準管、測定管具有可比性;配制好的 MDA標準品 4℃避光保存,至少3個月內有效。

4、配制MDA檢測工作液:臨檢測前,根據(jù)待測定的樣品數(shù)(含對照),參考下表新鮮配制適量的MDA檢測工作液。

檢測次數(shù)

1 次

10 次

20 次

TBA 工作液

0.75ml

7.5ml

15ml

抗氧化劑

0.031ml

0.31ml

0.62ml

MDA 檢測液

0.075ml

0.75ml

1.5ml

MDA 分離液

2.25ml

22.5ml

45ml

總體積

3.106ml

31.06ml

62.12ml


注意事項:

 

1、上述低溫試劑避免反復凍融,以免失效或效率下降。

2、參考取樣量:血清、血漿、尿液取0.1ml;低密度脂蛋白懸液取0.1~0.2ml;食用油取0.03ml;肝臟、心肌、肌肉等,取5%或10%勻漿 0.1~0.2ml。

3、測定樣品吸光度值較低時,可將水浴延長至80min,但應同時延長,以免造成批間差異。

4、待測樣本如不能及時測定,應置于-20℃保存,4天內穩(wěn)定。

5、避免使用 EDTA、枸櫞酸、氟化鈉、草酸等抗凝劑。

6、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

7、試劑開封后請盡快使用,以防影響后續(xù)實驗效果。

有效期:12個月有效;低溫運輸,按要求保存。